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PCR擴(kuò)增試劑盒的實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)介紹

更新時(shí)間:2021-09-26      點(diǎn)擊次數(shù):606
  PCR擴(kuò)增試劑盒適用于常規(guī)的PCR反應(yīng)和一些結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板如GC含量高、有二級結(jié)構(gòu)等的PCR擴(kuò)增,由于多種PCR增強(qiáng)劑和穩(wěn)定劑的發(fā)現(xiàn),穩(wěn)定預(yù)配好的PCR混合液不僅簡化了操作程序、減少了污染、降低勞動強(qiáng)度和取樣誤差,而且增加了PCR反應(yīng)的特異性,降低了對PCR條件的要求,可擴(kuò)增2個拷貝的目的模板,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加。該產(chǎn)品分為含染料和不含染料兩種體系,在PCR結(jié)束后可以直接電泳,無需再加入上樣緩沖液。
  PCR擴(kuò)增試劑盒實(shí)驗(yàn)事項(xiàng):
  1.樣本上PCR平臺可做的樣本包括血液,唾液,口腔拭子,在實(shí)驗(yàn)中,對于DNA投入量要求不是很高,根據(jù)不同項(xiàng)目需求,DNA投入量的范圍在100pg到100ng之間。
  2.進(jìn)行PCR反應(yīng)前,可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度,并轉(zhuǎn)移到PCR8聯(lián)管中,一方面是便于排槍操作,另一方面是加入相同起始量的gDNA,這樣可以降低終文庫的濃度差異,便于混合文庫。
  3.大多數(shù)情況下引物是1管,操作相當(dāng)方便;當(dāng)目標(biāo)區(qū)域是外顯子或者是其他連續(xù)區(qū)域時(shí),把引物分裝為2管,需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并,再進(jìn)行下一步反應(yīng)。
  4.執(zhí)行多重PCR反應(yīng)時(shí),特別是樣本量多的情況下,可以將T1設(shè)為一組,T2設(shè)為一組,便于制備反應(yīng)試劑混合液和排槍操作;并把解凍好的試劑放置在冰盒上,在冰盒上進(jìn)行加樣操作。
  5.實(shí)驗(yàn)中,可以在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)編號標(biāo)記,防止高溫或其他原因?qū)е掠浱栂?,避免后續(xù)產(chǎn)物混合操作失誤,造成樣本交叉污染。

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